科研用户最大的烦恼就是,和你取同一个样本、做同样研究工作的人太少了,导致在选择试剂盒的时候找不到客观、有价值的评测报告,于是最后同学们只能沿用师兄、师姐实验时采购的试剂盒。然而没有对比,就没有伤害——一些品牌知名度较高的,使用效果却不怎么样的产品就这么一直默默地幸存下来了。今天我们就来实测比较一下SIMGEN和国内知名大牌T**NGEN的高多糖多酚植物总RNA试剂盒之间的差异,选用的样本是典型的提取RNA困难的样本——马铃薯块茎。
实验目的:
对比SIMGEN和T**NGEN两个品牌的高多糖多酚植物总RNA试剂盒的性能差异。
实验材料:
马铃薯块茎、一次性手术刀、研钵
高多糖多酚植物总RNA试剂盒(SIMGEN Cat.No.5103050)、T**NGEN RNAprep PureRNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(DP441)
超微量电子天平(DENVER INSTRUMENT,TP-213)
旋涡震荡器(越新仪器,XH-C)
超微量分光光度计(SIMGEN Cat.No.sim100)
电泳仪(北京六一仪器厂,DYY-6C型 )
实验方法:
由于马铃薯块茎非常容易研碎,本次实验采用裂解液浸泡样本研磨法破碎样本后提取RNA,具体操作步骤如下:
实验结果:
1、在超微量分光光度计上分别用各自试剂盒的RNase-Free Water/ RNase-Free ddH2O调零,测量洗脱下来的RNA,结果如下:
1、2为SIMGEN高多糖多酚植物总RNA试剂盒的提取结果,3、4为T**NGEN RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒的提取结果。
2、在1%的琼脂糖凝胶上,加入5 μl洗脱的RNA进行电泳,结果如下:
分析与讨论:
1. 实验最初T**NGEN的RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒使用的裂解液是试剂盒中配备的裂解液SL,但是在研磨阶段裂解液SL与马铃薯块茎组织形成胶状物沉淀,实验根本无法继续进行下去,与该品牌官网宣传的“配有超强裂解能力的裂解液SL,仅需1小时即可从香蕉、西瓜、苹果、梨等果肉,红薯、马铃薯等块茎,棉花……” 内容严重不符。最后只好按照其说明书上的描述所说向T**NGEN公司索取了另一种裂解液HL来进行实验。
2. 尽管更换了裂解液HL,但是从测得的浓度以及电泳条带的亮度分析,T**NGEN的这款多糖多酚植物总RNA提取试剂盒只提取到了微量的RNA,差不多只有0.5 μg,提取效果与其网站上宣传的效果仍然不符,颇有“学术造假”之嫌疑。而SIMGEN的高多糖多酚植物总RNA试剂盒则提取到了5.9 μg、12.9 μg的RNA,是T**NGEN试剂盒的10倍以上,而且条带完整清晰,非常明亮,与分光光度计测得的浓度有很好的对应关系。
3. 马铃薯块茎中含有大量淀粉,切开后容易变褐色,是典型的高多糖多酚植物代表,因此我们有理由相信T**NGEN的RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒并不像其自己宣传的那样“专门针对多糖多酚等难提植物样本独特配置”,至少马铃薯块茎样本的提取效果就很不理想。而SIMGEN的高多糖多酚植物总RNA试剂盒提取马铃薯块茎RNA则轻松过关。