如何从唾液中提取RNA

随着基因健康体检的普及，获取人的DNA从最常见的血液中DNA提取，逐步改为从口腔拭子中提取，最后变成了从唾液中提取DNA。相应的，获取人的RNA也提出新的需求，希望从血液中提取改为从唾液中提取。

看似简单的一个样本变换需求，RNA的提取难度上却大大地提高了。

首先，唾液是一个含大量细菌的混合液，1 ml唾液大约含1亿个细菌，其次唾液中还含有大量的消化酶（最讨厌的是含有RNA酶）、溶菌酶、免疫球蛋白、各种无机盐离子以及白细胞、口腔脱落细胞、甚至包括病毒。在这一堆混合物中，真正我们所需要的是口腔脱落细胞及白细胞中的RNA，如何躲避RNA酶的攻击，去除基因组DNA，提高RNA的回收效率，是提取唾液中RNA的三大难点。

针对上述难点，我们逐一采取了相应的应对措施：

1. 由于唾液中富含RNA酶，收集的唾液如果用于RNA提取必须立即灭活RNA酶，不能像血液一样放置几小时后再提取RNA。所以我们特别选择了配套的唾液采集器，采集唾液后可立即混入裂解液，终止RNA酶的活性。

2. 由于基因组DNA比RNA更长，更粘稠，所以可以用特殊的过滤柱过滤唾液的裂解物，高效除去基因组DNA，却不损失RNA的数量。

3. 如果从唾液中富集口腔脱落细胞或白细胞，必定会增加操作步骤，延长RNA酶攻击RNA的时间，因此我们采取的方案是尽可能大体积地一次性提取RNA，但是由于RNA含量低，醇沉淀RNA根本不可行，所以采用核酸纯化柱富集、纯化RNA。

现将设计的唾液RNA提取方法公布如下：

我们用微量分光光度计来估计我们获得的2个唾液中RNA的质量：

总体来说OD₂₆₀/OD₂₈₀接近2.0，纯度很好，但是OD₂₆₀/OD₂₃₀比值很低，可能有盐分残留，但也不排除因为RNA浓度低，OD₂₆₀ 严重偏小所造成的假象。

用上述提取的唾液RNA扩增下β-actin，效果还是不错的：

最后要补充的是，由于RNA的总量还不到1μg，在提取唾液RNA的过程中可以添加适量的Carrier RNA, 以提高最终RNA的回收效率。