不同公司的RNasin产品性能的对比

不同公司的RNasin产品性能的对比

一、实验目的：

通过RT-PCR实验，对宝生物（Takara）和新景生物的RNasin产品的性能效果进行对比。

二、实验材料及设备：

Trizol 柱纯化总RNA试剂盒（simgen）、

Fast 1st strand cDNA Synthesis Kit(with gDNase)（simgen）、

2×SYBR Green PCR Mix（simgen）、

50×ROX Reference Dye（simgen）、

水浴锅（XMTD-6000，上海宜昌仪器纱筛厂）、

离心机（5452，德国eppendorf股份公司）、

ABI PRISM®7000荧光PCR仪（7000，美国ABI公司）、

漩涡振荡仪（XH-C，金坛市医疗仪器厂）。

三、实验方法：

设计：

四、实验步骤：

1.RNA提取

按照Trizol 柱纯化总RNA试剂盒（simgen）说明书操作提取RNA，用50 μl RNase-free水洗脱。

2.RNasin抑制RNase反应

按下表配置反应体系：

注：为是RNasin与RNase充分结合，所以需将RNasin和RNase先混合在一起；为使其他组分均匀，所以应多管一起配置，混匀后再分装至各管，如配置10管量时：

每管分装7μl，然后在将混合后的RNasin和RNase混合加入，补RNase-free H₂O至10μl，混匀。37℃30min使RNase反应，4℃保存待用。

3.cDNA合成

按Fast 1st strand cDNA Synthesis Kit(with gDNase)（simgen）说明书操作。

4.荧光PCR检测

按2×SYBR Green PCR Mix（simgen）说明书操作。

五、实验结果：

六、讨论与分析：

1.从图一、图二中可看出，当RNase的量增多时，cDNA的起始浓度会降低，说明RNasin只对一部分量的RNase产生抑制。未抑制的RNase仍会对RNA产生影响；

2.从图三到图六可以看出，在相同量的RNase和RNasin情况下，不同公司RNasin对RNase的抑制效果是不同的，新景生物的RNasin抑制RNase活性的效果比Takara生物的RNasin的抑制RNase活性的效果好；

3.从图七可以看出，在相同RNasin的量下，新景生物的RNasin对4ngRNase的抑制效果比Takara生物的RNasin对2ngRNase的抑制效果好，且新景生物的RNasin对8ng RNase的抑制效果接近Takara生物的RNasin对2ngRNase的抑制效果。