1、 取新鲜动物组织0.1-0.2g置于组织匀浆器中,加入预冷的细胞裂解液1买来,在水浴中迅速匀浆15-30s,以充分研碎组织。然后将细胞悬浮液吸入另一试管中。
2、 加入2mol醋酸钠(ph4.0)120μl,充分混匀。
3、 加入1.2ml酚:氯仿:异丙醇,充分混匀摇振10s,冰浴15min。
4、 将混合物转移至1.5mlEP管中,4℃、离心10000r/min,20min。
5、 移取上层水相至另一个EP管中,加入等体积的异丙醇,20℃,30min沉淀RNA
6、 4℃,离心12000r/min,15min。
7、 弃上清液,加入70%乙醇400ul,洗涤RNA沉淀物被悬浮,则4℃离心10000r/min,10min。
8、 弃上清液,自然干燥,但应避免沉淀完全干燥否则RNA难以溶解。
9、 加入100 μl无RNase水重悬RNA,或加1ml无水乙醇和1/10体积3mol醋酸钠(ph4.0),-70℃保存。