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不同公司的RNasin产品性能的对比
一、实验目的：
通过RT-PCR实验，对宝生物（Takara）和新景生物的RNasin产品的性能效果进行对比。
二、实验材料及设备：
Trizol 柱纯化总RNA试剂盒（simgen）、
Fast 1st strand cDNA Synthesis Kit(with gDNase)（simgen）、
2×SYBR Green PCR Mix（simgen）、
50×ROX Reference Dye（simgen）、
水浴锅（XMTD-6000，上海宜昌仪器纱筛厂）、
离心机（5452，德国eppendorf股份公司）、
ABI PRISM®7000荧光PCR仪（7000，美国ABI公司）、
漩涡振荡仪（XH-C，金坛市医疗仪器厂）。
三、实验方法：
设计：
编号 | RNA | RNase | RNasin |
T1 | 1μg | 2ng | 40U(Takara) |
T2 | 1μg | 4ng | 40U(Takara) |
T3 | 1μg | 8ng | 40U(Takara) |
T4 | 1μg | 16ng | 40U(Takara) |
S1 | 1μg | 2ng | 40U(Simgen) |
S2 | 1μg | 4ng | 40U(Simgen) |
S3 | 1μg | 8ng | 40U(Simgen) |
S4 | 1μg | 16ng | 40U(Simgen) |
四、实验步骤：
1.RNA提取
按照Trizol 柱纯化总RNA试剂盒（simgen）说明书操作提取RNA，用50 μl RNase-free水洗脱。
2.RNasin抑制RNase反应
按下表配置反应体系：
组分 | 使用量 |
5×g Buffer | 2 μl |
RNA | 1 μg |
RNasin | 40 U |
RNase | X ng |
RNase-free H2O | 补至10 μl |
注：为是RNasin与RNase充分结合，所以需将RNasin和RNase先混合在一起；为使其他组分均匀，所以应多管一起配置，混匀后再分装至各管，如配置10管量时：
组分 | 10管使用量 |
5×g Buffer | 20 μl |
RNA | 10 μg |
RNase-free H2O | 补至70 μl |
每管分装7μl，然后在将混合后的RNasin和RNase混合加入，补RNase-free H2O至10μl，混匀。37℃30min使RNase反应，4℃保存待用。
3.cDNA合成
按Fast 1st strand cDNA Synthesis Kit(with gDNase)（simgen）说明书操作。
4.荧光PCR检测
按2×SYBR Green PCR Mix（simgen）说明书操作。
五、实验结果：
六、讨论与分析：
1.从图一、图二中可看出，当RNase的量增多时，cDNA的起始浓度会降低，说明RNasin只对一部分量的RNase产生抑制。未抑制的RNase仍会对RNA产生影响；
2.从图三到图六可以看出，在相同量的RNase和RNasin情况下，不同公司RNasin对RNase的抑制效果是不同的，新景生物的RNasin抑制RNase活性的效果比Takara生物的RNasin的抑制RNase活性的效果好；
3.从图七可以看出，在相同RNasin的量下，新景生物的RNasin对4ngRNase的抑制效果比Takara生物的RNasin对2ngRNase的抑制效果好，且新景生物的RNasin对8ng RNase的抑制效果接近Takara生物的RNasin对2ngRNase的抑制效果。