送检鱼排粉中检测鸡源DNA组分

一、材料：

1. 样品：

由厦门**商贸有限公司提供。

2. 动物组织DNA试剂盒（Simgen，Cat.No.3101050）

4. PCR扩增试剂、引物、探针为杭州新景生物试剂开发有限公司自配或委托上海**生物技术有限公司合成。

5. PCR仪：ABI PRISM® 7500 Sequence DeteCtion System

6. 离心机：Thermo Biofuge pico

二、方法：

1. 用Simgen动物组织DNA试剂盒分离纯化鱼排粉中的DNA。

2. 按下列组分配制PCR检测试剂( 40 μl反应体系)：

Master Mix(2×)              20.0 μl

上游引物FP                1.0 μl

下游引物RP                1.0 μl

探针Probe                  0.5 μl

50× ROX                   0.8μl

ddH₂O                     11.7 μl

向每个PCR反应管中加入35 μl反应混合液，再加入5μl分离纯化的DNA进行RT-PCR检测。

注：阳性对照用鸡DNA作为模板，阴性对照用ddH₂O作为模板。

3. PCR循环条件设置： 95℃ 1min→40×（95℃ 15s→60℃ 30s）

三、结果判定：

1．有效性原则

阴性对照：无FAM荧光信号检出，未出现典型的扩增曲线。

阳性对照：有FAM荧光信号检出，并出现典型的扩增曲线。

以上要求必须同时满足，否则本次检测无效。

结果：

1. 送检的样品检测到鸡源DNA组分。

2. 结果分析：

①　送检样品和阳性对照均起线，阴性对照未起线，阳性对照CT值为15.213，送检样品CT值分别为32.681,33.385。故所检测鱼排粉样品中含有鸡源DNA。

②　注意：本基因检测仅能检测到鸡源DNA组分，不能检测到其他鸟类的DNA组分，即样品中若含有鸭、鹅等DNA组分，也是无法检测出的。

Ct值报告截图如下：

荧光PCR扩增曲线截图如下：