凤梨、和尚性别鉴定

一、材料：

1. 样本：鸟羽毛，由客户提供。

2. 微量DNA提取试剂盒（Simgen，Cat.No.3102050）

3. PCR扩增试剂、引物为杭州新景生物试剂开发有限公司自配或委托上海**生物技术有限公司合成。

4. PCR仪：Techne FPROGO5Y Progene Thermal

5. 离心机：Thermo Biofuge pico

二、方法：

1. 用Simgen微量DNA提取试剂盒分离纯化鸟羽毛中的DNA。

2. 按下列组分配制PCR检测试剂( 40 μl反应体系)：

Master Mix(2×)              20.0 μl

上游引物FP                1.0 μl

下游引物RP                1.0 μl

dd H₂O                     13 μl

向每个PCR反应管中加入35 μl反应混合液，再加入5μl分离纯化的DNA进行PCR检测。

注：阳性对照用公鸟和母鸟的DNA作为模板，阴性对照用dd H₂O作为模板。

3. PCR循环条件设置：

4. 琼脂糖凝胶电泳30 min。

三、结果判定：

有效性原则

1. 阴性对照：无扩增条带。

2. 阳性对照：公的对照有一条扩增条带，母的对照有两条扩增条带。

以上要求必须同时满足，否则本次检测无效。

结果：

1. 送检的“凤梨”、“和尚”鸟羽毛鉴定结果均为公鸟的羽毛。

2. 结果分析：

①从电泳图中的阳性对照可以看出公鸟扩增产物只有一条明显可见的条带，母鸟扩增产物有两条明显可见的条带。

②从电泳图中可以看出送检“和尚”羽毛提取的DNA的扩增产物只有一条明亮的条带，与公的阳性对照符合，判断为公鸟的羽毛。

③从电泳图中可以看出送检“凤梨”羽毛提取的DNA的扩增产物比较暗淡，结果不是很明显，只能隐约看出有一条暗淡的条带，与公的阳性对照符合，因此判断为公鸟的羽毛。由于此样本只寄送了一根羽毛，无法进行复检验证。扩增产物条带暗淡是由于提取到的DNA量较少，DNA量少则是由样本原因导致的。有可能是因为送检的羽毛不是新鲜拔下的，是自然脱落的，这将导致羽毛中含有的DNA降解严重，提取到的DNA量会变少，导致扩增产物比较暗淡。

PCR扩增结果电泳图：