凤梨小太阳性别鉴定

一、材料：

1. 样本：鸟羽毛，由客户提供。

2. 微量DNA提取试剂盒（Simgen，Cat.No.3102050）

4. PCR扩增试剂、引物为杭州新景生物试剂开发有限公司自配或委托上海**生物技术有限公司合成。

5. PCR仪：Techne FPROGO5Y Progene Thermal

6. 离心机：Thermo Biofuge pico

二、方法：

1. 用Simgen微量DNA提取试剂盒分离纯化鸟羽毛中的DNA。

2. 按下列组分配制PCR检测试剂( 40 μl反应体系)：

Master Mix(2×)              20.0 μl

上游引物FP                1.0 μl

下游引物RP                1.0 μl

dd H₂O                     13 μl

向每个PCR反应管中加入35 μl反应混合液，再加入5μl分离纯化的DNA进行PCR检测。

注：阳性对照用公鸟和母鸟的DNA作为模板，阴性对照用dd H₂O作为模板。

3. PCR循环条件设置：

4. 琼脂糖凝胶电泳25 min。

三、结果判定：

有效性原则

1. 阴性对照：无扩增条带。

2. 阳性对照：公的对照有一条扩增条带，母的对照有两条扩增条带。

以上要求必须同时满足，否则本次检测无效。

结果：

1. 送检的鸟羽毛鉴定为公鸟的羽毛。

2. 结果分析：

(1) 从电泳图中的阳性对照可以看出公鸟扩增产物只有一条明显可见的条带，母鸟扩增产物有两条明显可见的条带。

(2) 从电泳图中可以看出送检羽毛提取的DNA扩增产物有一条明亮的条带和一条暗淡几乎不可见的条带，与公的阳性对照较为符合，判断送检羽毛为公鸟的羽毛。而另一条隐约可见的条带推测是母鸟样本污染所致，例如公鸟长期与母鸟关在一起，羽毛上可能沾染有母鸟的碎屑，导致扩增出较暗的第二条带，当减少PCR扩增循环次数后，这种污染条带将更加暗淡不可见。 

PCR扩增结果电泳图：