4℃下放置2个月的抗凝血能提取到DNA吗？

实验室的小伙伴们都知道，提取DNA的血液样本需要放在﹣20℃冷冻保存，如果是为了提取RNA还必须放在﹣80℃保存才行。万一不小心将血液样本遗忘在4℃冰箱几个星期的话，血液中的RNA估计已经完全没救了，那DNA的情况又是怎么样的呢？正好实验室这有一管血液不小心放在4℃两个月了，让我们一起来测试一下吧！

一.实验目的：

测试提取4℃下放置2个月的抗凝全血中的DNA。

二.实验材料：

4℃放置2个月的抗凝全血

全血DNA小量试剂盒（SIMGEN Cat.No.3001050）

全血/培养细胞DNA试剂盒（SIMGEN Cat.No.3002050）

2×PCR Mix（Simgen，Cat.No.7003100）、Human β-globin gene引物（Forward：TTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC；Reverse：CCAGGATTTTTGATGGGACACG）。

旋涡震荡器（越新仪器，XH-C）

电子恒温不锈钢水浴锅（上海宜昌仪器纱筛厂）

台式离心机（eppendorf Centrifuge 5415 D）

超微量分光光度计（SIMGEN Cat.No.sim100）

电泳仪（北京六一仪器厂，DYY-6C型 ）

PCR仪（Techne FPROGO5Y Progene Thermal）

三.实验内容：

四.实验结果：

1. 在超微量分光光度计上用各自试剂盒中的BufferTE调零，测量提取好的DNA，结果如下：

样品编号1、2为全血DNA小量试剂盒提取的DNA；样品编号3、4为全血/培养细胞DNA试剂盒提取的DNA

2. 在1%的琼脂糖凝胶上，加入5 μl提取到的DNA，电泳25 min，结果如下：

3. 在1%的琼脂糖凝胶上，加入5 μl扩增产物，电泳20 min，结果如下：

五.实验讨论与分析：

1. 从超微量分光光度计浓度测量结果上可以看出，两个试剂盒均提取到了一定数量的DNA，结合图一结果可以进一步证实4℃下放置2个月的抗凝全血中的DNA并没有完全降解，只是拖尾严重，但还保留有明显的主带。

2. 从图二的电泳结果分析可以得出结论：4℃放置2个月的抗凝全血中提取的DNA并不影响PCR扩增。

3. 仔细观察图一中血液基因组DNA的电泳条带，会发现DNA的拖尾实际上是类似DNA Marker的条带，这是典型的凋亡细胞特征条带。其真正的原因是白细胞（红细胞无核，提取不到DNA）由于得不到机体提供的养分，已经开始死亡，自溶。这也说明4℃条件下，血液中的DNA会缓慢地降解，确实不适合用作长期保存血液。

4. 最后我们可以告诉大家一个好消息，就是万一不小心将血液遗忘在了4℃冰箱中，短期内（至少2个月内）提取DNA影响不大（主要影响就是提取到的DNA拖尾严重），提取到的DNA用作模板也不影响目的片段不是很长的PCR扩增。