Pfu DNA Polymerase

单位定义

74℃，30min，使10 nm dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活力单位。

活性检测条件：50 mM Tris-Hcl（pH 9.0, 25℃）,50 mM NaCl, 5 mM MgCl₂,0.2 mM each dNTPs(包括[3H]-Dttp), 200 μg/ml 活化的小牛胸腺DNA和0.1 mg/ml BSA。

质量控制

SDS-PAGE 检测纯度大于99%。经检测无外源核酸酶活性，PCR方法检测无宿主DNA残留，能有效扩增人类基因组中的单拷贝基因。

PCR体系成分

1. 模板DNA的纯度：很多残留的核酸提取试剂会影响PCR反应，包括蛋白酶、蛋白变性剂(比如SDS、胍盐)、高浓度盐(KAc、NaAc、辛酸钠等)和高浓度EDTA等。纯度不高的模板（比如煮沸法获取的模板）用量请勿超过PCR反应体系的1/10（比如50 μl反应体系中加入模板的体积不应超过5μl）。如果模板DNA纯度太差，可使用新景（Simgen）PCR清洁试剂盒（Cat. No.2101050）对模板DNA进行纯化及浓缩。经新景（Simgen）PCR清洁试剂盒纯化后的模板使用量可多至PCR反应体系体积的1/2。

2.模板DNA用量：极微量的DNA也可以作为PCR摸板，但为保证反应的稳定性，50μl体系建议使用10⁴拷贝以上的靶序列作为模板。模板 DNA 的推荐使用量：

人基因组 DNA：0.05 μg~0.5 μg/50 μl PCR反应体系

大肠杆菌基因组 DNA：10 ng~100 ng/50 μl PCR反应体系

λ DNA：0.5 ng~5 ng/50 μl PCR反应体系

质粒DNA：0.1ng ~ 10 ng/50 μl PCR反应体系

如需用扩增产物作为模板再扩增，应至少将扩增产物稀释1,000至10,000倍后再作为模板使用，否则可能会出现涂抹条带或无特异性条带。

3. 引物浓度：一般每条引物配制的浓度为10 μM (50×)，工作浓度为0.2 μM。引物过量可能会出现非特异性扩增，引物过少则可能会降低扩增效率。