实测快速通用型基因组DNA提取试剂盒的性能

实验样本类型多，提取DNA需要买好几种试剂盒？今天小新为有这方面烦恼的用户推荐一款新产品——快速通用型基因组DNA提取试剂盒，这款试剂盒能从容应对各类常见样本，让您做到“一盒在手，各种DNA都有”。接下来就让小新带大家看看这款试剂盒是不是真有这么好用。

一、 实验目的

测试快速通用型基因组DNA提取试剂盒对不同类型样本基因组DNA的提取效果。

二、 实验材料

枯草杆菌、猪肉、小蓬草、人的粪便、人的抗凝全血、1.5 ml离心管若干

快速通用型基因组DNA提取试剂盒（Simgen Cat.No.3302050）

2×PCR Mix（Simgen Cat.No.7003100）

人1.3 kb β-球蛋白引物（F：TTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC/R：CCAGGATTTTTGATGGGACACG）

细菌16s rDNA引物（27F：AGAGTTTGATCMTGGCTCAG/1492R：GGHTACCTTGTTACGACTT）

植物GAPDH引物（F：GCTCACTTGAAGGGTGG/R：CCATTCGTTGTCGTACCA）

溶菌酶（Simgen Cat. No. 8009500）

研钵

旋涡振荡器（越新仪器，XH-C）

台式小量离心机（eppendorf centrifuge 5415 D）

电子恒温不锈钢水浴锅（上海宜昌仪器纱筛厂）

超微量分光光度计（Simgen Cat.No.sim100）

电泳仪（北京六一仪器厂，DYY-6C型）

PCR仪（Techne FPROG5Y Progene Thermal）

三、 实验步骤

（一）样本DNA提取

样本使用前处理：

【从动物组织中提取基因组DNA】

1. 用手术刀切取50 mg猪肉组织，再用刀尖将组织剁成匀浆状，转入一个洁净的1.5 ml离心管中。

2. 加入150 μl Buffer TE、300 μl Buffer GE，旋涡振荡30秒混合均匀。

3. 加入20 μl蛋白酶K贮存液，56℃水浴10分钟。

4. 加入500 μl Buffer PE，用力摇晃5~10次形成乳浊液，再旋涡振荡30秒混合均匀，最高速（≥12,000×g）离心1分钟。

【从植物组织中提取基因组DNA】

1. 称取200 mg小蓬草植物组织，剪成小块放入研钵中，加入液氮，使组织冷冻完全后，快速、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止组织融化，研磨充分后将研钵放入56℃水浴至样品粉末刚开始融化。加入300 μl Buffer TE，继续研磨30秒混匀。

2. 转移200 μl研磨好的匀浆至1.5 ml离心管中，如匀浆体积不足200 μl，补加Buffer TE至200 μl。

3. 加入300 μl Buffer GE和20 μl蛋白酶K贮存液，立即旋涡振荡1分钟混合均匀。56℃水浴10分钟。

4. 加入500 μl Buffer PE，用力摇晃5~10次形成乳浊液，再旋涡振荡30秒混合均匀，最高速（≥12,000×g）离心5分钟。

【从培养细胞﹑淋巴细胞﹑全血或骨髓、骨头中提取基因组DNA】

1.   收集200 μl全血于1.5 ml离心管。

2.   加入300 μl Buffer GE和20 μl蛋白酶K贮存液。立即旋涡振荡30秒混合均匀。

3.   56℃水浴10分钟。

4.   加入500 μl Buffer PE，用力摇晃5~10次形成乳浊液，再旋涡振荡30秒混合均匀，最高

速（≥12,000×g）离心1分钟。

【从细菌中提取基因组DNA】

1. 用1.5 ml离心管收集5 ml细菌培养物，加入100 μl Buffer TE，旋涡振荡充分悬浮细菌。加入100 μl溶菌酶溶液，旋涡振荡约15秒混匀，37 ℃水浴30分钟。

2. 加入300 μl Buffer GE和20 μl蛋白酶K贮存液。立即旋涡振荡30秒混合均匀。

3. 56℃水浴10分钟。

4. 加入500 μl Buffer PE，用力摇晃5~10次形成乳浊液，再旋涡振荡30秒混合均匀，最

高速（≥12,000×g）离心1分钟。

【从粪便中提取基因组DNA】

1. 用1.5 ml离心管收集50 mg粪便，加入150 μl Buffer TE，旋涡振荡直至粪便颗粒全部悬浮。

2. 加入300 μl Buffer GE和20 μl蛋白酶K贮存液。立即旋涡振荡30秒混合均匀。

3. 56℃水浴10分钟。

4. 加入500 μl Buffer PE，用力摇晃5~10次形成乳浊液，再旋涡振荡30秒混合均匀，最高速（≥12,000×g）离心1分钟。

【后续相同的操作步骤】

5. 吸取所有上清液加入到核酸纯化柱中（核酸纯化柱置于2 ml离心管中），盖上管盖，12,000×g离心30秒。

6. 弃2 ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2 ml离心管中，在核酸纯化柱中加入800 μl Buffer WB，盖上管盖，12,000×g离心30秒。

7. 弃2 ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2 ml离心管中，在核酸纯化柱中加入300 μl Buffer WB，盖上管盖，最高速（≥12,000×g）离心1分钟。

8. 弃2 ml离心管，将核酸纯化柱置于一个洁净的1.5 ml离心管中，在纯化柱的膜中央加入100 μl 56℃温育的Buffer TE，盖上管盖，室温静置1分钟，12,000×g离心30秒。

9. 弃纯化柱，得到的DNA放于﹣20℃冰箱备用。

（二）PCR扩增

扩增体系：

扩增条件：

1. 全血DNA（人1.3 kb β-球蛋白引物）/粪便DNA（细菌16s rDNA引物）：94℃,5 min，{94℃,45sec；55℃,45sec；72℃,1min30sec}×30 cycles，72℃,10min。

2. 小蓬草DNA（植物GAPDH引物）：96℃,3 min，{94℃,30sec；58℃,50sec；72℃,1min}×35 cycles，72℃,10min。

四、 实验结果

1. 在超微量分光光度计上用Buffer TE调零，测量提取的DNA，结果如下：

2. 在1%的琼脂糖凝胶上加入5 μl洗脱的基因组DNA/扩增产物/DNA Marker进行电泳，结果如下：

一、 分析与讨论

1. 由浓度测量结果和DNA电泳图可知，快速通用型基因组DNA提取试剂盒从五种不同类型的样本中都成功提取到了基因组DNA。这五类样本包括了动物、植物、细菌、粪便、血液这些常见的实验样本，证明了快速通用型基因组DNA提取试剂盒的强大通用性。

2. 快速通用型基因组DNA提取试剂盒在提取上述各种样本基因组DNA的过程中都没有额外进行RNase A的消化，但是将提取到的DNA电泳时却都没有观察到残留的RNA条带，甚至是最容易残留RNA的植物、细菌、粪便等样本。说明这个产品可以不用额外添加RNase A就能去除RNA。

3. 快速通用型基因组DNA提取试剂盒采用了一项特殊的萃取技术，能使样本中被蛋白酶K消化后的各种残留物（包括未消化完全的样本碎片、蛋白、脂类物质、色素、多糖等）都萃取到下相中。也就是说在吸取上相过柱纯化这一操作步骤前，DNA已经提前进行了一次预纯化，这也就是为什么快速通用型基因组DNA提取试剂盒只需要一种洗液洗涤纯化柱的原因。从后续扩增产物电泳结果中我们也可以发现，快速通用型基因组DNA提取试剂盒提取的DNA均不影响后续的PCR扩增，即使是应对粪便、植物这类抑制物较多的样本也完全没有问题。

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