细菌DNA提取方法

一、水煮模板法——主要用于PCR反应

1、  接种单菌落于LB或平板中，连续划线，37℃培养18-24小时。

2、  刮取1～2接种环菌苔加入150ul三蒸水中，混匀，100℃煮沸10min。

3、  12000转/分钟离心10min，取上清液，-20℃保存备用。

二、CTAB/NaCl法

1、  接种一单菌落于5mlLB中，30℃培养过夜。

2、  取1ml种子培养液接入1002%LB中，37℃、220r/min培养16小时。

3、  5000r/min离心10min弃去上清。

4、  加入10mlTE离心洗涤后，用10mlTE溶解菌体，混匀，-20℃保存备用。

5、  取3.5 ml菌悬液，加入184ul10%SDS，混匀，加入37ul10mg/ml蛋白酶k，混匀，37℃温育1小时。

6、  加入740ul5mol/NaCl，再加入512 ul CTAB/NaCl,混匀，65℃温育10min。

7、  加入等体积的氯仿/异戊醇，混匀，10000r/min离心5min，保留上清。

8、  上清中加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25:24:1），混匀，10000r/min离心5min，保留上清。

9、  加入0.6倍的异丙醇，混匀，10000r/min离心5min，收集DNA沉淀，用70%乙醇离心洗涤DNA沉淀。

10、用1 mlTE溶解DNA加入终浓度为20ug/mlRNaseA,4℃保存。