近期连续接到电泳小白的质量投诉,究其原因是看电泳没经验--感觉很有必要就一种很容易被误读的电泳图进行深入分析:
大家第一眼看上去觉得最后一孔出现拖尾带是个什么情况?拖尾严重且DNA主带较暗,是DNA降解了吗?
错。主带(长片段)是基因组DNA,拖尾带是残留的降解RNA条带。--凭什么这么说?
1. 用户提取的是新鲜分离的小鼠肝脏组织DNA,并且没有加RNA酶消化。
2. 同样条件提取的DNA(第六孔)残留的拖尾带是不连续的,集中在某一区域(可以解读为残留的降解RNA较少,如果降解DNA的典型带型参考图四)。
所以小编立刻坚决地否定了用户有关DNA有降解的投诉,并预言:
1.如果在提取DNA时加入RNase A就不会出现这种现象。
2.延长电泳时间,RNA拖尾会消失,DNA主带会变亮。
3.将电泳凝胶放置一段时间(如过夜),拖尾带会变暗甚至消失,而DNA主带会变亮(可能变模糊但不会消失)。
用户带着满满的疑惑尝试了延长电泳,结果对比如图二:
有人也许会有疑问,如果不是DNA降解的话,那么DNA主带为什么会这么暗呢?其实这并非DNA量少产生的,而是由于残留的RNA过多以致电泳过程中将大部分EB带走,使得DNA主带没有足够的EB对其进行染色。但是如果继续电泳一段时间,或者干脆电泳至RNA跑到电泳缓冲液中后,DNA也就会染上足够的EB了,这时就能看到正常亮度的DNA主带了。
我们来看看真正有降解的DNA条带是怎样的吧:
是不是觉得第二孔和图一的第七孔很像呢?如果小编说这是DNA降解的拖尾而不是RNA降解的拖尾,是不是有点懵了。也许你们会想这看上去和刚才那RNA降解的条带没什么不同,凭什么说是DNA降解呢?别急,既然刚刚解释过如果小片段的RNA过多会将EB带走而导致跑得慢的长片段DNA没有足够的EB染上染色,那么小片段的DNA(降解的DNA)也会有同样的效果了。如果把电泳时间延长的话就能看出不同的结果了,如下图:
是不是觉得有点不可思议,刚开始相似的两幅电泳图最后却是不同的电泳结果,那么怎么去判断呢?最简便的判断方法就是看提取的样本是否是新鲜样本。如果是新鲜的样本,那么拖尾的就是降解的RNA,因为新鲜的样本一般不会出现DNA降解,但是很容易残留RNA;如果是陈旧的样本,那么一般来说拖尾就属于降解的DNA了。
如果不能确定样本是否新鲜,那么另一种有效的判断方法就是延长电泳时间。如果是降解RNA造成的拖尾,那么延长电泳时间后就会使RNA完全降解或者使RNA跑到缓冲液中。但是降解DNA造成的拖尾则不会出现这种现象,因为DNA降解时有很多片段仍然比较大,很难跑到缓冲液中,并且DNA比RNA稳定,不会在电泳的时间中出现很明显的降解或消失。
所以在分析凝胶电泳图时,充足的电泳时间也很有必要,这样不仅可以使DNA Marker的各条带分开,容易对比长度,也能确认是何种核酸残留所造成的拖尾。
添加两种优化的Loading Buffer染料,不遮挡DNA条带荧光的亮度。条带细致调整,每一个片段都足够清晰。 查看产品
添加两种优化的Loading Buffer染料,不遮挡DNA条带荧光亮度条带细致调整,每一个片段都足够清晰 查看产品
添加两种优化的Loading Buffer染料,不遮挡DNA条带荧光的亮度。条带细致调整,每一个片段都足够清晰。 查看产品
特别添加的红色和黄色两种电泳指示染料,不会削弱DNA在紫外线下的显色效果,较常用的电泳指示染料(溴酚蓝、二甲苯青等)具有更佳的使用效果。 查看产品
特别添加的红色和黄色两种电泳指示染料,不会削弱DNA在紫外线下的显色效果,较常用的电泳指示染料(溴酚蓝、二甲苯青等)具有更佳的使用效果。 查看产品
添加两种优化的Loading Buffer染料,不遮挡DNA条带荧光的亮度。条带细致调整,每一个片段都足够清晰。 查看产品
添加两种优化的Loading Buffer染料,不遮挡DNA条带荧光的亮度。调点细致调整,每一个片段都足够清晰。 查看产品
添加两种优化的Loading Buffer染料,不遮挡DNA条带荧光的亮度。调点细致调整,每一个片段都足够清晰。 查看产品
添加两种优化的Loading Buffer染料,不遮挡DNA条带荧光的亮度。调点细致调整,每一个片段都足够清晰。 查看产品
添加两种优化的Loading Buffer染料,不遮挡DNA条带荧光的亮度。调点细致调整,每一个片段都足够清晰。 查看产品
添加两种优化的Loading Buffer染料,不遮挡DNA条带荧光的亮度。调点细致调整,每一个片段都足够清晰。 查看产品
添加两种优化的Loading Buffer染料,不遮挡DNA条带荧光的亮度。调点细致调整,每一个片段都足够清晰。 查看产品
添加两种优化的Loading Buffer染料,不遮挡DNA条带荧光的亮度。调点细致调整,每一个片段都足够清晰。 查看产品
添加两种优化的Loading Buffer染料,不遮挡DNA条带荧光亮度条带细致调整,每一个片段都足够清晰 查看产品
添加两种优化的Loading Buffer染料,不遮挡DNA条带荧光亮度条带细致调整,每一个片段都足够清晰 查看产品
添加两种优化的Loading Buffer染料,不遮挡DNA条带荧光的亮度。条带细致调整,每一个片段都足够清晰。 查看产品
添加两种优化的Loading Buffer染料,不遮挡DNA条带荧光的量。条带细致调整,每一个片段都足够清晰。 查看产品
添加两种优化的LoadingBuffer染料,不遮挡DNA条带荧光的亮度。调点细致调整,每一个片段都足够清晰。 查看产品
添加两种优化的染料的LoadingBuffer,不遮挡DNA条带荧光的亮度。调点细致调整,每一个片段都足够清晰。超螺旋质粒DNA电泳时较酶切后的条带泳动速度更快,所以很难准确判断其长度,若用Supercoiled DNA Ladder作为对照,便可精确判断超螺旋质粒DNA的位置。 查看产品
添加的红色和黄色两种电泳指示染料,不会削弱DNA在紫外线下的显色效果,较常用的电泳指示染料(溴酚蓝、二甲苯青等)具有更佳的使用效果。 查看产品
特别添加的红色和黄色两种电泳指示染料,不会削弱DNA在紫外线下的显色效果,较常用的电泳指示染料(溴酚蓝、二甲苯青等)具有更佳的使用效果。 查看产品