植物RNA提取方法

异硫氰酸胍法　

取1 g叶片，液氮下充分研磨，迅速转移至离心管，加入3 mL 异硫氰酸胍提取液(4M异硫氰酸胍、2.5 M柠檬酸钠，pH7.0，0.5 %十二烷基肌氨酸钠，0.1 M巯基乙醇) 混匀。再依次加入0.3 mL 2 M NaAc (pH 4.0)，3 mL水饱和酚和0.6 mL 氯仿/ 异戊醇(49∶1) ，混匀后冰浴15 min。4 ℃，12 000 r/ min 离心20 min。上清液加入等体积苯酚/ 氯仿再次抽提，离心，上清液加入等体积异丙醇，-20 ℃沉淀RNA。4 ℃，12000r/ min 离心10 min。75 %乙醇洗涤两次，100 %乙醇脱水。溶于100μl DEPC 重蒸水中。

尿素法　

取1 g叶片，加入过量液氮充分研磨，快速转入离心管，加入6～8倍体积的裂解缓冲液(7 M 尿素，50 mM Tris-Cl ，pH8.0，10 mM Na₂EDTA ，pH 8.0，3.5 M NaCl ，6.25 %Tris 饱和酚，pH 8.0 ，0.1 % SDS + 0.1 % LDS) ，轻轻搅拌后，0 ℃冰浴20 min。4 ℃，12000 r/ min离心15 min。上清液加1/ 3 体积3 M NaAc (pH5.3) ，1/ 5 体积的氯仿/ 异戊醇(24∶1)，混匀后0 ℃冰浴20 min。4 ℃，12000 r/ min 离心15 min。上清液加入等体积冰浴冷却的异丙醇，冰浴10 min。4 ℃，5000 r/min 离心10 min。沉淀溶于5 mL 含有0.1 % SDS 的TE 缓冲液中，加入8M LiCl 至终浓度2.5 M，冰浴3 h 。4 ℃，12000 r/min 离心10min。75 %乙醇洗涤沉淀两次，空气干燥后溶于DEPC 处理水中。

Tris - 硼酸法

离心管中加15 mL 提取缓冲(150 mMTris ，50 mM EDTA ，4 % SDS ，硼酸调pH 至7.5) 和10μl 巯基乙醇，加热到65 ℃。1 g叶片充分研磨后转移到离心管中混匀， 65 ℃， 1min。室温放置5 min。加1.5 mL 5 MKAc ，4 mL乙醇，涡旋。20 mL 氯仿/ 异戊醇( 24∶1) 混匀后，8000 r/min 离心20 min。上清液加入10 mL 苯酚和10 mL 氯仿/ 异戊醇，10000 r/min ，10 min。上清液中加入0.3 倍体积12 M LiCl 混匀， - 20 ℃过夜。10000 r/min ，1 min。沉淀溶于10 mL 3 MLi₂Cl 中，10000 r/ min ，10 min。沉淀溶于470μl DEPC 重蒸水，加30μl 5M KAc ，等体积氯仿/ 异戊醇抽提，10000 r/ min ，5 min。上清液转入两倍体积的乙醇中- 20 ℃沉淀RNA。4 ℃，10 000r/ min 离心20 min。沉淀干燥后溶于100 μl DEPC 重蒸水中。