粪便DNA纯化试剂盒应用案例

一、实验目的：

检测使用Simgen粪便DNA纯化试剂盒提取的粪便DNA能否进行PCR扩增。

二、PCR检测操作步骤：

1.取一个0.6ml离心管，加入140μl的2×Taq Plus PCR Master Mix，再加入14μl细菌16s引物（正向、反向引物各7μl），最后加入91μl超纯水，混合均匀。

2.按每管35μl的体积将步骤1的混合物分装到6个PCR管中，再分别加入5μl超纯水（阴性对照）、5μl Simgen粪便DNA纯化试剂盒提取的粪便DNA(四管)、5μl细菌DNA（阳性对照）。

3.扩增条件： 

94℃,5min，

{94℃,45sec；55℃,45sec；72℃,1min30sec}×30cycles，

72℃,10min。

4.按下图内容进行电泳检测：

三、电泳结果：

1-4：用Simgen粪便DNA纯化试剂盒提取的DNA（同一粪便样本）             5：阴性对照扩增产物   

6-9：用Simgen粪便DNA纯化试剂盒提取的DNA作为模板的扩增产物       10：阳性对照扩增产物

四、实验结论：

1. 从1-4的电泳结果分析，Simgen粪便DNA纯化试剂盒成功提取到了粪便DNA，提取的DNA存在明显降解，不过还是能明显看到主条带。

2. 从5-10的电泳结果分析，提取的粪便DNA成功扩增出了条带，且条带清晰明显，与阳性对照一致，说明Simgen粪便DNA纯化试剂盒提取的粪便DNA洁净度高，所含抑制物少。

综上所述：使用Simgen粪便DNA纯化试剂盒所获得的核酸抑制物及杂质少，能够满足后续PCR扩增实验的需求。