一、实验目的:
比较simgen病毒核酸纯化试剂盒和传统煮沸法提取核酸的效果
二、实验方法:
1.采用Simgen病毒核酸纯化试剂盒提取HBV DNA(详见产品说明书);
2.采用传统煮沸法提取HBV DNA
3.将所获核酸进行扩增
三、实验样本:
血清
四、实验结果:
将所得的DNA作为模板扩增,得:
曲线1:传统煮沸法提取的血清中HBV DNA作为模板的扩增曲线(50 μl扩增体系中加入5 μl分离的DNA)。
曲线2:Simgen病毒核酸纯化试剂盒分离纯化的同一血清(200 μl)中HBV DNA作为模板的扩增曲线(50 μl扩增体系中加入5 μl纯化的DNA)。
曲线3:提高Simgen病毒核酸纯化试剂盒分离纯化的HBV DNA作为模板的使用量的扩增曲线(50 μl扩增体系中加入25 μl纯化的DNA)。
五、实验结论:
1.根据曲线1和曲线2分析,Simgen病毒核酸纯化试剂盒所提取的HBV DNA的浓度较传统煮沸法更高,因此检测灵敏度也更高。
2.根据曲线2和曲线3分析,增加HBV DNA模板使用量,CT值减小,未见明显的抑制效果,说明采用Simgen病毒核酸纯化试剂盒提取的HBV DNA纯度较高,不含杂质和抑制物。