全血DNA提取方法

方法一：

1.将冰冻的血在室温下溶化；
2.取1ml血液转入一无菌的2ml离心管中，加入等体积的PBS磷酸盐缓冲液，充分混匀后12000rpm离心5min，弃上清；
3.加入667μl STE，24μl的20%的SDS，37℃水浴1h；
4.加10μl的20mg/ml的蛋白酶K混匀，55℃水浴消化过夜（10～14h）；
5.将消化的样品加入等体积的Tris饱和酚，充分摇匀，12000rpm离心10min；
6.将上层水相转入另一无菌2ml离心管中；再加入等体积的Tris饱和酚，充分摇匀，12000rpm离心10min；
7.将上层水相转入另一无菌2ml离心管中；并加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1），旋涡振荡至充分混匀，12000rpm离心10min；
8.将上层水相转入另一无菌2ml离心管中；并加入等体积的氯仿∶异戊醇（24∶1），充分振荡混匀，12000rpm离心10min；
9.将上清液转移到另一无菌2ml离心管中；加入2倍体积的冰乙醇，1/10体积醋酸钠水平摇动，直到可见絮状DNA析出；
10.将样品置-20℃冰箱冷冻30min或冰浴15～20min，取出后再次12000rpm离心10min，使DNA沉淀；
11.用枪头将DNA挑到另一无菌离心管中，用适量的70%乙醇洗涤并晃动，以洗出DNA的杂质；
12. 倒出乙醇，将DNA用真空干燥或自然晾干，加入适量的TE缓冲液回溶，-20℃保存备用。

方法二：

蛋白酶K法

取抗凝血样500μL，加入等体积的蒸馏水溶解红细胞，于12000 r/min离心15 min，弃上清。在上管中加500μL 蒸馏水，12000 r/min离心15m in，弃上清.在沉淀中加入500μL裂解液1 mo l/LTris-HCl pH 7. 5、0. 5 mo l/L EDTA pH7. 5、0. 5 %SDS、1μL RNase、2μL蛋白酶K，55℃消化过夜。用500μL酚-氯仿-异戊醇(25∶24∶1) 抽提，10000 r/min离心10min，将上清转移入另一洁净的管子，重复上述操作1次。加2倍体积无水乙醇颠倒混匀数次至DNA絮状析出，用75 %的乙醇沉淀DNA抽干，50μL TE溶解DNA，4℃保存备用。

方法三：

氯仿-异戊醇法

取抗凝血500μL 置于1.5 mL Eppendorf管中，加细胞裂解缓冲液1mL (0.32 mo l/L 蔗糖； 1% Triton X-100；0.005 mmol/L MgC_l2·6H₂O；0.012 mo l/LTris-HCl pH7. 5)，混合，12000 r/m in离心5min，弃上清。重复上述裂解1次。于沉淀物中加入500μL灭菌蒸溜水溶解红细胞，12000 r/m in离心10 min弃上清，用80μL DNA稀释缓冲液(0.375mo l/L N aCl；0.12 mo l/L EDTA ) 将沉淀轻轻重悬，加入15μL 20 % SDS，100μL 5 mo l/LN aCl，充分混匀30s，再加入240μL无菌双蒸水、350μL 氯仿-异戊醇(24∶1 体积) 混合液充分混匀30s，12000 r/min 离心3min。将上清转至另支Eppendorf 管中，加860 LL 无水乙醇颠倒混匀数次至DNA 絮状析出，12 000 r/m in 离心3 min，弃上清，37℃干燥. 50μL TE 溶解DNA，备用。

方法四：

碘化钾法

于350μL 抗凝全血中加无菌双蒸水900μL 溶解，10000 r/min 离心5m in 弃上清，重复上述试验1次，将沉淀物混匀。加70μL 5 mol/L KI，旋涡振荡30s，加0. 9 % NaCl 300μL，氯仿-异戊醇(24∶1) 450μL，充分振荡1min，12 000 r/m in 离心5m in，吸取水相层于另支Eppendorf 管中，加异丙醇180μL，充分混匀，12000 r/m in 离心5 m in 弃净上清，加无水乙醇1mL，12000 r/min 离心5min，弃净乙醇，待干，以50μL TE 溶解DNA备用.