从种子中提取DNA

一、实验目的：

从种子中提取DNA。

二、实验材料：

黄豆、面粉、研钵、植物DNA试剂盒（Simgen，Cat.No.3201050）

三、实验方法：

本次实验采用Simgen的植物DNA试剂盒方法来提取种子中的DNA，步骤如下：

1. a.黄豆：

称取黄豆1颗（约200mg），放入研钵中研磨至粉末状，加入1.5 ml 65℃预热的Buffer PL，继续研磨，分别吸取600 μl溶解物加入2个1.5 ml 离心管（相当于每次从约100mg 黄豆中提取DNA）；

   b.面粉（小麦粉）：

2个1.5 ml 离心管中分别称取100mg和200mg面粉，加入500ml 65℃预热的Buffer PL，旋涡震荡至充分溶解；

2. 65℃水浴10分钟，水浴期间每隔2~3分钟翻转离心管数次以帮助DNA的释放；

3. 加入350 μl Buffer K，盖上管盖，用力摇晃15秒，旋涡振荡30秒。13000 rpm离心5分钟；

4．将离心上清液倒入核酸纯化柱中，离心去滤液；

5. 依次用500 μl Buffer WA和600 μl Buffer WB过柱洗涤；

6. 最高速离心，去除纯化柱上残留的乙醇；

7. 将核酸纯化柱置于一个洁净的1.5ml离心管中，用60 μl 65℃预热的Buffer TE 洗脱DNA；

8. 在微量紫外分光光度计上测量DNA的浓度；

9. 琼脂糖凝胶电泳。

四、实验结果：

1. 在微量紫外分光光度计上用Buffer TE调零，测量洗脱下来的DNA，结果如下：

2. 在0.6%的琼脂糖凝胶上，加入8μl提取到的DNA，电泳30 分钟，结果如下：

1、2：大豆DNA    3：100 mg面粉提取的DNA    4：200 mg面粉提取的DNA    M：DL15000 DNA Marker

五、讨论与分析：

1．用Simgen植物DNA试剂盒能提取到黄豆、面粉（小麦粉）的DNA，说明在干燥的种子中，DNA保存得比较完整。

2．面粉DNA的电泳条带显示有明显的拖尾现象，产生了类似凋亡细胞的DNA带型。推测是由于种子被磨碎后，DNA更容易失去组蛋白的保护，从而形成凋亡细胞的DNA带型。

3．由于植物种子中DNA含量较低，可适度提高样本的用量（以面粉DNA提取为例），但样本用量不应大于200mg。以200 mg面粉提取DNA为例，样本加入裂解液（Buffer PL）水浴后变得非常粘稠，操作变得困难，且DNA回收量与100mg相比也没有成倍地增长。

4．植物种子通常会含有大量的蛋白、油脂、多糖（淀粉为主），Simgen植物DNA试剂盒在提取过程中能很好地抵御这些干扰。

Simgen实验室