真菌菌丝PCR

作者：新景实验室
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真菌菌丝PCR

实验目的

通过不同的方法处理真菌菌丝并进行PCR，看是否能扩出条带。

实验设备与材料

快速DNA提取检测试剂盒（simgen）、

2×Taq Plus PCR Master Mix（simgen）、

水浴锅（XMTD-6000，上海宜昌仪器纱筛厂）、

离心机（5452，德国eppendorf股份公司）、

PCR仪（A-80343,Progene）、

漩涡振荡仪（XH-C，金坛市医疗仪器厂）。

实验方法及步骤

方法1：使用快速DNA提取检测试剂盒

取真菌菌丝与洁净的1.5ml离心管，加100μl裂解液，用研磨棒将菌丝研磨破碎，再加10μl蛋白酶K混匀，56℃水浴10min，95℃水浴5min（由于蛋白酶K会消化Taq酶，所以要使蛋白酶K失活，以免Taq酶被消化），取75μl 上清作为PCR模板待用。

配置PCR扩增体系，加1/10体积模板进行PCR扩增

组成成分

使用量

2×Taq Plus PCR Master Mix

20 μl

Primer 正向（10 μM）

1μl

Primer 反向（10 μM）

1μl

ddH2O

14μl

模板

4μl

 

方法2：直接PCR

配置PCR扩增体系，将菌丝直接加入体系中进行PCR扩增

组成成分

使用量

2×Taq Plus PCR Master Mix

20 μl

Primer 正向（10 μM）

1μl

Primer 反向（10 μM）

1μl

ddH2O

18μl

模板

菌丝

扩增程序：

 

扩增产物4℃保存。

取PCR产物进行电泳

实验结果


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