Simgen SYBR Green PCR Mix的选择

作者:新景实验室
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近来有用户反映Simgen2×SYBR Green PCR Mix7106100产品做PCR检测,与某公司的SYBR Green Mix相比较,发现有CT值有增大的现象,这是为什么呢?

小编经过深入研究,发现当选用 2×SYBR Green PCR Mix 配合用户的引物PCR检测时,CT值就与某公司的SYBR Green Mix几乎一致了。原来2×SYBR Green PCR Mix7106100)是追求高特异性的产品;而2×SYBR Green PCR Mix 则是追求高灵敏度的产品--但是它对于引物的要求会比较高,如果引物设计得不好,在PCR的过程中,模板起始浓度较低时很容易出现非特异扩增,下面就让小编给大家介绍一下这两款产品的优点及不足:

 


下面是两款产品实例测试:
 

PCR体系配置


2
×SYBR Green PCR Mix的标准曲线 
 
 从上图所述,2×SYBR Green PCR Mix7106100)的相关系数高达0.999,而且重复性高。

2×SYBR Green PCR Mix Ⅱ(7107100)的标准曲线

 


 

从上图所述,2×SYBR Green PCR Mix在高浓度模板时,相关系数高达0.999,重复性高;但是引物设计不完美时,一旦有低模板浓度,就会出现非特异扩增,从而降低相关系数。

  

CT值表


CT值表格及融解曲线看,可看出2×SYBR Green PCR MixⅡ在灵敏度上比2×SYBR Green PCR Mix7106100会高出0.5-1CT值左右,但是在低浓度模板时(10
-7),2×SYBR Green PCR MixⅡ的CT值出现异常,这是因为在引物设计的不是很好时,2×SYBR Green PCR MixⅡ在低浓度模板时易出现非特异扩增。  

综上所述,2×SYBR Green PCR Mix7106100)的特异性比2×SYBR Green PCR Mix 高,但是在灵敏度上不如2×SYBR Green PCR Mix。所以倘若追求高特异性,小编推荐使用2×SYBR Green PCR Mix7106100,如果追求灵敏度,还是推荐使用2×SYBR Green PCR Mix

 

 

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