15分钟轻松提取唾液基因组DNA

作者:新景实验室
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在一个阳光明媚的早晨,小新正在忙碌的赶着写实验报告,抬头发现实验室的师兄师妹们正在贡献自已的唾液,貌似打算做一次唾液基因组DNA提取实验。看到此景,小新心想:要不我也贡献点,顺便测测自已唾液里的DNA有多少浓度?所以马上开始行动~拿着自已的唾液带着好奇心的我走进实验室,恰好看见师兄正拿着我们的全血DNA小量试剂盒准备做实验。小新心里充满疑问,问:“咋们这个试剂盒也能提唾液里的基因组DNA?”“那当然了,全血、唾液、细胞悬浮液都可以”师兄笑着说。“好,那我来做吧”因为想看看是不是真的有这个效果,小新决定接手了这个实验~

据小新所知,市场上从新鲜唾液里提取基因组DNA的试剂盒基本上都需要蛋白酶K的消化,而且实验过程需要1个半小时左右。而我现在利用的全血DNA小量试剂盒则无需蛋白酶K消化,15分钟就可以完成实验。这无论在试剂上还是时间上都有着明显的差距,就这样,带着好奇心的小新开始做实验啦~

 

实验材料及设备

样本:300μl新鲜唾液

全血DNA小量试剂盒(simgen Cat. No. 3001050、无水乙醇、

设备:台式小量离心机(可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子)、水浴锅和旋涡振荡器

其他耗材:1.5ml离心管、移液器吸头(为避免样品间的污染,建议选用含有滤芯的移液器吸头)、一次性手套及防护用品和纸巾

 

差不多15分钟后,按耐不住好奇心的小新急匆匆的拿着8支刚提好的DNA在超微量分光光度计(simgen)上测量了DNA含量和纯度。我们来看看~

 

    从图上看到,试剂盒从8个样提取的DNAD260/D280值都在1.8左右,此外,小新最后buffer TE洗脱体积为80μl,从不同人的样本中所得到的DNA2-5μg,可能这时你们会觉得为什么提到的DNA浓度会不一样?嘻嘻~因为不同的人的口腔中的脱落细胞量不同,我们所提到的DNA浓度就不一样了~由此看来全血DNA小量试剂盒(simgen提取唾液DNA还是能提到核酸的,但是这些核酸是不是我们所需要的基因组DNA还需验证,所以随后小新又以唾液DNA为模板进行了普通PCR

 

β-球蛋白引物:FTTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC

RCCAGGATTTTTGATGGGACACG,(产物长度1300bp

模板:人类基因组DNA(阳性样本)、随机取两管唾液DNA(检测样本1、检测样本2)。

反应条件:



PCR电泳图:
    


从上图可以看出,检测样本1和检测样本2扩出的条带和阳性对照是在同一位置,对照DNA Marker可看出条带正好在1200bp偏上的位置,是我们所需的PCR产物的长度1300bp左右,说明小新提取的唾液DNA是人类基因组DNA

看到最终的实验结果,小新之前心里的质疑自然而然的就消失了,原来15分钟真的能从新鲜唾液里提取到基因组DNA(内心有点小澎湃)。好啦~今天就写到这(让我去激动会儿)~对了,如果有什么疑问的话,欢迎咨询小新哦~technical@simgen.cn ,拜~

 

 

 

 

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