粪便细菌DNA提取方法

作者:新景实验室
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1. 0.2-0.5g粪便置于Ep管中(冰水浴),加入1mlPBS,漩涡振荡混匀,200xg离心5min,取上清,冰水浴;

2. 向沉淀中加入1mlPBS,重复步骤1

3. 混合两次上清,用300g离心5min,弃沉淀;

4. 两次上清用10000rpm离心8min,沉淀菌体;

5. 所得沉淀用1mlPBS洗涤至上清无色;

6. 20过夜;

7. Ep管中加入500ulDNA提取液,6ul蛋白酶K37摇床160rpm40min,再加入56ul20%SDS65条件下水浴2h,每隔15-20min轻摇Ep管;

8. 等体积酚/氯仿抽提,8000rpm离心10min,取上层水相,重复两次,除净蛋白;

9.  0.6倍体积异丙醇沉淀DNA12000rpm离心10min4);

10. 70%乙醇洗涤DNA沉淀两次,自然干燥;

11. 沉淀中加入15ulTE,在37孵育箱中孵育30min