植物DNA试剂盒提取未知真菌

作者:新景实验室
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前段时间,实验室的一瓶未使用过的 YPD 培养基发现染菌了,出现了一大朵类似蘑菇的真菌,形态奇异。想着好好的培养基不能白白浪费了,要让这偷吃的真菌付出代价,于是小新决定提取这个未知真菌的 DNA。(另外,对这种真菌有所了解的小伙伴可以在评论区留言,让小新知道这个可恶的家伙叫什么。)

一、实验目的:

提取未知真菌的 DNA

二、实验步骤: 

使用Simgen植物DNA试剂盒提取污染YPD 培养基的未知真菌。(具体详见说明书)

三、实验样本:

污染YPD 培养基的未知真菌。

四、实验结果:

(一)DNA 提取环节

1.在超微量分光光度计上用 Buffer TE 调零,测量提取好的 DNA,结果如下:

表一:未知真菌提取的 DNA 浓度
simgen-植物/真菌DNA试剂盒-未知真菌提取的 DNA 浓度

2.在 1%的琼脂糖凝胶上,加入 5 μl 提取到的 DNA,电泳 15 分钟,结果如下:

simgen-植物/真菌DNA试剂盒-电泳结果图

从浓度测量结果分析可知,植物/真菌 DNA 提取试剂盒成功提取出了未知真菌的 DNA,且浓度颇高。但是 A260/A280 比值达到 2.00,推测提取的 DNA 面含有大量 RNA 或者降解的 DNA。经电泳图验证,确实存在大量拖带,与测量所得数据相符合。

(二)DNA 处理纯化环节

1.在超微量分光光度计上用 Buffer TE 调零,测量提取好的 DNA,结果如下:

表二:经 RNase A 处理过的未知真菌的 DNA 浓度
simgen-植物/真菌DNA试剂盒-经 RNase A 处理过的未知真菌的 DNA 浓度

2.1%的琼脂糖凝胶上,加入 5 μl 提取到的 DNA 电泳 25 分钟,结果如下:
simgen-植物/真菌DNA试剂盒-电泳结果图
对比表二和表一数据可以看到,经过RNase A 处理后 DNA 溶液的浓度减少了 10 倍以上,说明之前提取的 DNA 中含有大量的 RNA。从电泳图可以看到,经过 RNase A 处理后,拖带变少了,这是因为其中的大量 RNA 被降解去除了。但是拖带情况仍旧存在,说明其中含有一部分降解的 DNA。


五、实验讨论:

1.本次实验成功提取到了未知真菌样本的 DNA,从图二可以明显看到,虽然有部分降解,但提取的 DNA 主带清晰可见。

2.对比样本 1 和样本 2 的数据可以看到,两管样本的 DNA 浓度相差了 2 倍左右,推测可能是因为研磨时该真菌样本中存在较多的颗粒物质,在提取步骤3 转移到离心管时,第一个样本吸取的大多是上清液,第 2 个样本吸取了较多底部的这种颗粒,使得两管样本最后提取的 DNA 数据相差较大。

3.从表一和表二数据分析可知,该未知真菌提取的 DNA 中含有大量的 RNA占了总浓度的 90%以上,相对来说 DNA 含量比较少,平均 500 mg 样本中只有约 5.7 μg DNA。这也是真菌样本(比如酵母)的共通点:DNA 含量较少而RNA 含量高,因此建议大家在提取真菌时尽可能的多加样本,确保能提到足够的 DNA,并且在提取步骤 3 中补加 RNase A 储存液(Simgen Cat. No. 8001001用以消化 RNA