动物组织DNA提取方法

作者:新景实验室
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1. 组织块解冻,取适量组织于PBS溶液中清洗干净后放入装有500微升PBS的离心管中(1.5ml),用剪刀剪碎;12000rpm离心8min,取出弃上清;

2. 加入0.45ml TES混匀,再加入50ul SDS10%),20ul蛋白酶K20mg/ml),充分混匀后,于56保温4-6h,每2h1,至体系透亮为好。

3. 放置到室温,加入等体积饱和酚(500ul),上下温柔翻转5min,12000r/m,离心 10min,分离水相和有机相,小心吸取上层含核酸的水相,到一个新的1.5ml离心管。

4. 加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25241),上下温柔翻转5min12000r/m,离10分钟,取上层转移到新的1.5ml离心管中。

5. 加入等体积氯仿:异戊醇(241),上下温柔翻转5min10000r/m,离心10分钟,取上层清液到一个新的1.5ml离心管。

6. 加入1/10体积的NaAc4保存),加入2倍体积的-20预冷的无水乙醇沉淀DNA置于-20中保存30min或更久;观察现象。

7. 12000 r/m,离心10分钟,弃乙醇。

8. -20保存的75%乙醇洗涤,12000 r/m,离心5分钟,去乙醇,55干燥DNA 9. 加入适量TE溶解DNA(具体依DNA的多少而定)(一般50μL),-20保存备用。