超纯总RNA提取试剂盒（原Trizol柱纯化总RNA试剂盒）（浙杭械备20220442号）关于"RNA后续实验效果不佳" 的回答

答：

1、盐分残留过多。注意Buffer WA和Buffer WBR的洗涤顺序，确保按正确的顺序洗涤纯化柱。

2、乙醇残留过多。注意高速空离步骤不可省略，并且空离后的核酸纯化柱应小心取出，避免倒置，以免使2 ml离心管管底的残留滤液接触到核酸纯化柱。

3、使用了过多的RNA用作反转录模板。通常20 μl反转录反应体系中加入100~1000 ng RNA作为模板比较适宜。注意cDNA作为PCR模板时需要适当稀释，以免残留的反转录酶（包括已经失活的反转录酶）干扰Taq酶的活性。

4、反转录后的DNA-RNA复合体对荧光PCR的影响。建议减少随机引物的用量或用特异性引物进行反转录，或者在反转录后添加RNase H进行处理，去除DNA-RNA复合体。