可能的原因:
1、Buffer I中所含的RNase A活性降低。如果加入RNase A的Buffer I在2~8℃保存的时间超过6个月的,应再补充RNase A至终浓度100 μg/ml。
2、菌液量过多或者细菌本身特性导致RNA含量过多,不能完全被RNase A降解。可以增加Buffer I中RNase A的浓度。
冬季环境温度低,会导致RNase A活性降低,可在中和步骤后将中和产物放置到37℃水浴5-15分钟后再进入下一步操作,以提高RNase A的消化效率。