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快速质粒DNA小量试剂盒关于"酶切失败" 的回答

问题描述:

酶切失败

答:

1、 限制性酶切后电泳质粒消失,没有条带,或者电泳条带出现严重的拖尾现象。可能是选用了野生型的或者是end A+的宿主菌所致,并且未用Buffer W1洗涤纯化柱。请确保用Buffer W1洗涤纯化柱,或者按附录中的方法对质粒DNA作进一步的纯化。

2、 酶切不能完全切开。本试剂盒纯化得到的质粒DNA不存在酶切抑制物,可直接用于酶切(比如20 μl酶切体系中,除去2 μl 10×酶切缓冲液和1 μl限制性内切酶的体积后,可直接加入17 μl洗脱的质粒DNA用于酶切)。如果酶切不能完全切开,应尝试减少质粒DNA的用量,或者增加限制性内切酶的用量,并适当延长酶切时间。