Trizol柱纯化试剂盒DIY的方法

Trizol试剂是基于异硫氰酸胍/酚法的一种即用型的从不同类型的样本中提取总RNA的试剂，Trizol纯化RNA既不限制样本种类也不限制起始样本量，是实验室最常用的RNA纯化方法。但是用Trizol试剂纯化RNA的不足之处在于需要很长的离心和RNA干燥时间，并且纯度通常还比过柱纯化获得的RNA来的更差。

所以在RNA纯化柱随处可得的情况下，自制Trizol柱纯化试剂盒不失为提升工作效率和工作质量的好方法。我们来看一下怎么在实验室自己进行Trizol柱纯化吧。

自备试剂：

(1) Trizol试剂

(2) RNA纯化柱（购自Simgen RNA纯化柱，Cat. No. 7301050）

(3) 70%乙醇

(4) DEPC处理水

实验仪器与耗材：

(1) RNase-free 1.5 ml离心管和移液器及吸头

(2) 台式小量离心机（可配离心1.5 ml离心管和2 ml离心管的转子）

(3) 液氮与研钵

操作方法：

(1) Trizol 方法操作至离心分相，进入以下操作步骤。

(2) 吸取上层水相转移到一个洁净的1.5 ml 离心管中，加入等体积的70%乙醇，勿弃吸头，直接用吸头吸注两次混匀，吸取600 μl混合液转移到核酸纯化柱（核酸纯化柱置于2 ml 离心管中）中，盖上管盖，12000 rpm 离心30秒。

(3) 弃2 ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2 ml 离心管中，将1.5 ml 离心管中剩余的液体全部加入核酸纯化柱中，盖上管盖，12000 rpm 离心30秒。

(4) 弃2 ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2 ml 离心管中，在核酸纯化柱中加入700 μl 70%乙醇，12000 rpm 离心30秒（最好重复洗涤一次）。

(5) 弃2 ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2 ml 离心管中，14000 rpm 离心1分钟。

(6) 弃2 ml 离心管，将核酸纯化柱置于一个RNase-free的1.5 ml离心管中，在纯化柱中加入50 -100 μl DEPC处理水，盖上管盖，室温静置1分钟，12000 rpm 离心30秒。

(7) 弃纯化柱，洗脱的RNA可立即用于各种分子生物学实验；或者将RNA储存于-70℃备用。

使用效果：

用DIY的Trizol柱纯化试剂盒提取的大肠杆菌RNA的电泳图

第一条泳道是DL 2000 Ladder Marker，5 μl；

第二、三泳道是Trizol柱纯化方法纯化的细菌RNA，8 μl。

用分光光度计测得的RNA数据：

新景生物实验室