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如何提高感受态细胞的转化率?

作者:新景实验室
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1. 细菌的生长状态实验中应密切注视细菌的生长状态和密度尽量使用对数生长期的细胞(一般通过检测OD600来控制DH5α菌株 OD6000.5 时细胞密度是 5 × 107/ml )

2. 所有操作均应在无菌条件冰上进行

3.  CaCl2处理的细胞在低温条件下一定的时间内转化率随时间的推移而增加24小时达到最高之后转化率再下降(这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的)

4. 化合物及无机离子的影响Ca2+的基础上联合其他二价金属离子(Mn2+ Co2+)DMSO 或还原剂等物质处理细菌可使转化效率大大提高( 100-1000)

5. 所使用的器皿必须干净迹量的去污剂或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率

6. 质粒的大小及构型的影响用于转化的应主要是超螺旋的DNA

7.一定范围内转化效率与外源 DNA 的浓度呈正比