1. 细菌的生长状态:实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞(一般通过检测OD600来控制。DH5α菌株 OD600为 0.5 时细胞密度是 5 × 107/ml );
2. 所有操作均应在无菌条件和冰上进行;
3. 经 CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的推移而增加,24小时达到最高,之后转化率再下降(这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的);
4. 化合物及无机离子的影响:在Ca2+的基础上联合其他二价金属离子(如 Mn2+或 Co2+)、 DMSO 或还原剂等物质处理细菌,可使转化效率大大提高( 100-1000倍);
5. 所使用的器皿必须干净。迹量的去污剂或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率;
6. 质粒的大小及构型的影响:用于转化的应主要是超螺旋的DNA;
7.一定范围内,转化效率与外源 DNA 的浓度呈正比。
pUC-19载体是小分子量、高拷贝的大肠杆菌质粒,长度均为2,686 bp。 查看产品
·一种常用于质粒克隆的菌株。·其φ80lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。·recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。 查看产品
·用于蓝白斑筛选;·recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。 查看产品
·该菌株用以T7 RNA 聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。·T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子,该区整合于BL21的染色体上。·该菌适合于非毒性蛋白的表达。 查看产品
·TOP10菌株转化效率高达108以上。·适用于高效的DNA克隆和质粒扩增。·能保证高拷贝质粒的稳定复制 查看产品