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需要准备的试剂 氯仿、异丙醇、75%乙醇（用RNase-free水配制）、RNase-free的水
1. 匀浆处理（Homogenization）
直接取新鲜的血液，加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。彻底吸弃上清，收集白细胞沉淀。每100-200μl血液收集的白细胞沉淀加入1ml TRIzol。
2．分层（Phase Separation）
a. 样品加入Trizol后，室温放置5min，使样品充分裂解。注：如不进行下一步操作，样品可放入-70℃长期保存。
可选步骤：4℃ 12000 rpm 离心10分钟，取上清。
如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。
b. 每1ml TRIzol加入200μl氯仿，剧烈振荡混匀后室温放置3-5 min使其自然分相。
3．RNA沉淀（RNA Precipitation）
a. 4℃12000rpm离心10-15min。样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，把水相（通常可吸取550μl）转移到新管中。注：小心吸取水相，千万不要吸取中间界面，否则将导致RNA样品中有DNA污染。
b. 在上清中加入等体积冰冷的异丙醇，室温放置10-20min。4℃ 12,000 rpm离心10min，弃上清，RNA沉淀于管底。
4．RNA漂洗（RNA Wash）
a. RNA沉淀中加入1ml 75%乙醇（用RNase-free水配制），温和振荡离心管，悬浮沉淀。每1ml Trizol加入1ml 75%乙醇。
b. 4℃ 5000-8000 rpm离心1-2min，弃上清；短暂快速离心，用移液器小心吸弃上清，注意不要吸弃沉淀。室温放置1-2分钟晾干沉淀。
注：RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。
5. 溶解RNA（Redissolvingthe RNA）
沉淀中加入50-100μl RNase-free水，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存。
