1. 组织块解冻,取适量组织于PBS溶液中清洗干净后放入装有500微升PBS的离心管中(1.5ml),用剪刀剪碎;12000rpm离心8min,取出弃上清;
2. 加入0.45ml TES混匀,再加入50ul SDS(10%),20ul蛋白酶K(20mg/ml),充分混匀后,于56℃保温4-6h,每2h摇1次,至体系透亮为好。
3. 放置到室温,加入等体积饱和酚(500ul),上下温柔翻转5min,12000r/m,离心 10min,分离水相和有机相,小心吸取上层含核酸的水相,到一个新的1.5ml离心管。
4. 加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),上下温柔翻转5min,12000r/m,离心10分钟,取上层转移到新的1.5ml离心管中。
5. 加入等体积氯仿:异戊醇(24:1),上下温柔翻转5min,10000r/m,离心10分钟,取上层清液到一个新的1.5ml离心管。
6. 加入1/10体积的NaAc(4℃保存),加入2倍体积的-20℃预冷的无水乙醇沉淀DNA,置于-20℃中保存30min或更久;观察现象。
7. 12000 r/m,离心10分钟,弃乙醇。
8. -20℃保存的75%乙醇洗涤,12000 r/m,离心5分钟,去乙醇,55℃干燥DNA。 9. 加入适量TE溶解DNA(具体依DNA的多少而定)(一般50μL),-20℃保存备用。