快速质粒DNA小量试剂盒关于"关于快速质粒DNA小量试剂盒说明书操作的问题。" 的回答

问题描述:

1.用20 ml培养基培养单菌过夜,用快速质粒DNA小量试剂盒提取,浓度只能达到160-230 ng/μl?

2.按照说明书中,挑一个单克隆到5毫升的培养基中,摇12-16小时,然后直接离心操作后,使用100μl洗脱液洗脱,质粒DNA最低浓度70ng/μl最高270ng/μl,一般140ng/μl,是不是提到的质粒DNA浓度一般都这个水平?

答:

1.快速质粒DNA小量试剂盒说明书中写的是用1-5 ml培养基培养单菌过夜,不能用20 ml培养基提质粒DNA,菌太多会导致难以裂解,影响实验操作和减少质粒得率。在实验操作时,切记按照说明书的步骤来操作,如果按照以往经验或者前辈的方法,结果反而会适得其反。

2.因为是挑一个单克隆到5毫升的培养基中培养,每个培养基的生产状况不一样,最后得到的质粒浓度偏差大是正常的。影响质粒提取浓度有很多因素,质粒的拷贝数情况、细菌生长情况、提取时菌液用量等。