精液/镜子DNA纯化试剂盒关于"精液DNA试剂盒提出来的DNA浓度过低" 的回答

问题描述:

1. 样本精子挺多的,加无水乙醇后有些沉淀始终震不开,把沉淀一起吸到柱子上也不会堵柱子,但最后DNA浓度就很低,是什么原因

2. 试过上面的操作后,DNA溶度还是很低(不到10ng/μl),同一批抽提的浓度又可以达到50ng/μl

3. 精液DNA试剂盒抽出来的DNA可以做全外显子测序么?


答:

1.可能是DNA溶解不掉,可以将TE适度加热,增加Buffer TE洗脱量(可增至200μl),延长静置时间,再次洗脱看看。

2.可以将沉淀用枪头吹打,如果出现堵枪头的情况,最简单的方法就是重做,精液的用量减到1/21/4,用生理盐水补充到200 ul再操作(比如50 ul精液+150 ul生理盐水)。

3.如果测序对DNA没有特殊要求,先进行PCR后测序的话就可以。

注:要把沉淀加到柱子上,沉淀中的DNA片段太长,很难洗脱下来——旋涡振荡混匀有一个非常重要的目的是打断基因组DNA。加乙醇后混匀肯定是越粗暴操作,DNA浓度越高。(可阅读simgen公众号文章“提取DNA应该粗暴还是温柔”,里面有详细说明)