如何做好RNA电泳实验

作者:新景实验室
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RNA,即核糖核酸,是存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体,在遗传表达与调控研究、疾病研究和物种鉴定等分子生物学领域都有着重要应用。

RNADNA不同,是单链结构,本身就不稳定,再加上它的天敌——RNA酶(RNase)广泛存在于自然界中,又非常稳定,用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能使RNase完全失活。因此,RNA非常容易降解,在提取中必须做好相应的保护措施。而在提取之后,为了确认RNA提取是否成功,一般我们都会进行电泳观察,这时候同样需要注意,如果操作不当,那么得到的电泳图可能就会不尽如人意。下面就给大家介绍一些RNA电泳常见的情况。






看了这么多RNA电泳图,那么如何来做好RNA电泳呢?经典的RNA电泳用的是甲醛琼脂糖凝胶电泳,利用甲醛与谷氨酸残基的单亚氨基基团形成不稳定的碱基配对,这些配对通过阻止链内碱基配对而使RNA维持在变性状态,不会被RNase降解。但是近些年报导的甲醛中毒事件令人谈色变,在20171027日,世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中,甲醛更是被列入了一类致癌物中。因此很多人不愿意使用甲醛琼脂糖凝胶电泳。

那么不使用甲醛琼脂糖凝胶电泳方法,如何做好RNA电泳呢?今天小新就将实验室RNA电泳方法分享给大家作参考。

1. 将电泳槽、制胶槽、梳子等用0.1%DEPC37℃浸泡过夜,然后用RNase-free的水冲洗干净;

2. RNase-free的水配置1×TAE,制胶和电泳液也要使用RNase-free的水配置的1×TAE

3. 向电泳液中加入0.05%蛋白酶K贮存液Simgen Cat.No.8000224,混合均匀,静置过夜(16~24小时,由于蛋白酶K最适活性在60℃左右,夏天可适当缩短,冬天可适当延长),第二天即可进行RNA电泳。

解释:RNase不管如何稳定,本质还是蛋白质,而蛋白酶K就是专门分解蛋白质的,用上述方法进行RNA电泳,既能保证RNA在电泳过程中不会被降解,又无毒无害,能够放心使用希望这个方法对各位读者有所帮助,能够做好RNA电泳实验。