如何提取松杉纲植物样本的DNA

作者:新景实验室
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前段时间,小新在做植物DNA提取实验时失败了,重复实验后还是没有提取到DNA。当时使用的样本是罗汉松的叶片,小新查了相关资料了解到罗汉松属于裸子植物亚门松杉纲,这类植物都是复杂抗逆植物,核酸较难提取。于是小新就想到了植物/真菌DNA试剂盒,这款试剂盒在之前的文章中也出现过,当时提取的是真菌样本。其实它不仅能提取复杂的真菌样本,同样也能提取复杂的植物样本。

为了验证植物/真菌DNA试剂盒确实能提取这类样本的DNA,小新又选了3松杉纲植物(湿地松、雪松、水杉)进行对比实验,下面就让我们看看结果如何。

实验目的

对比Simgen的两种植物DNA提取试剂盒对松杉纲植物DNA提取效果的差异。

 

实验材料:

1. 湿地松、雪松、水杉、一次性手术刀、研钵

2. 植物DNA试剂盒Simgen Cat.No.3201050、植物/真菌DNA试剂盒Simgen Cat.No.3200050

3. 超微量电子天平(DENVER INSTRUMENTTP-213

4. 电子恒温不锈钢水浴锅(上海宜昌仪器纱筛厂)

5. 旋涡振荡器(越新仪器,XH-C

6. 台式离心机(eppendorf Centrifuge 5415 D

7. 超微量分光光度计(Simgen Cat.No.sim100

8. 电泳仪(北京六一仪器厂,DYY-6C型)

实验方法:

操作步骤如下:


实验结果:

1、在超微量分光光度计上分别用各自试剂盒的Buffer TE调零,测量洗脱下来的DNA,结果如下:


2、1%的琼脂糖凝胶上,加入5 μl洗脱的DNA进行电泳,结果如下:


讨论与分析:

1. 从浓度测量结果来看,可以明显看到两个试剂盒提取效果的差异。植物DNA试剂盒提取的DNA测得的浓度都极低,植物/真菌DNA试剂盒提取的DNA测得的浓度则远高于植物DNA试剂盒提取的DNA。结合图一、图二的电泳结果可以进一步证明植物DNA试剂盒几乎没有提取到肉眼可见的DNA条带,而植物/真菌DNA试剂盒则成功提取到了DNA

2. 从图一、图二的电泳图中可以看到植物/真菌DNA试剂盒提取的DNA中有明显的RNA残留,这也与测得的A260/A280比值相符合。一般新鲜样本提取的DNA残留有RNA是正常情况,并不影响后续实验。若是想要彻底去除RNA ,可在水浴环节加入5 μl RNase A储存液(50 mg/mlSimgen Cat. No. 8001001)即可。

3. 从松杉纲植物叶片提取到的DNA浓度都不高,可能是该类植物叶片中含的纤维素比较高所导致。还好植物/真菌DNA试剂盒一次可以提取500 mg植物样本中的DNA,后续可以用提高样本用量的方法来弥补。

4. 对于水杉、湿地松、雪松3种植物来说,使用植物DNA试剂盒提取的效果不明显,无法提到DNA,而使用植物/真菌DNA试剂盒后提取效果明显,验证了植物/真菌DNA试剂盒确实能提取松杉纲植物样本的DNA

 

植物DNA试剂盒操作步骤简单,但面对有丰富衍生物的特殊植物样本也有力不从心的时候。植物/真菌DNA试剂盒虽然操作步骤略微复杂,但对于有各种复杂衍生物的植物、真菌样本却都能应付,欢迎大家索要试用装尝试一下吧。