长片段PCR技术心得分享PCR技术自1983Mullis发明以来，给生命科学带来了历史性的变化，现已成为分子遗传学、基因组测序和作图、法医学、系统动物学等各领域内不可缺少的工具。但是，普通的PCR最长只能扩展2-3kb左右的短片阅读全文
方法一 大肠杆菌质粒DNA的大量提取 (碱法)1．将含有质粒的大肠杆菌在LB液体培养基(含适量抗生素)中37℃培养16-20 小时。 2．用含抗生素的LB培养基繁殖大肠杆菌37℃，250rpm，震荡培养1阅读全文
1、快速微量提取法1.取1.5ml菌体培养物于一灭菌Ep管中，12000rpm离心1min，丢去上清夜，收集菌体。2.加入400μl裂解液（40mMTris-醋酸，20mM醋酸钠，1mMEDT阅读全文
1.0.2-0.5g粪便置于Ep管中（冰水浴），加入1mlPBS，漩涡振荡混匀，200xg离心5min，取上清，冰水浴；2.向沉淀中加入1mlPBS，重复步骤1；3.混合两次上清，用300g离心5min，阅读全文
1.取50~100mg组织（新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可）置1.5ml EP管中，加入1ml Trizol充分匀浆，室温静置5min。2.可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10阅读全文
1. 挑取大肠杆菌菌单菌落，培养至稳定期，取菌液 2.0 mL 于2.0 mL离心管离心得菌体。2. 每管加入 1 mL Trizol 溶液，盖紧管盖，激烈振荡15 s，室温静置5 min 4℃，12000 g，离心 10 min；取上清转阅读全文
一、水煮模板法——主要用于PCR反应1、 接种单菌落于LB或平板中，连续划线，37℃培养18-24小时。2、 刮取1～2接种环菌苔加入150ul三蒸水中，混匀，100℃煮沸10min。3、 12000转/阅读全文
一、基因组DNA提取方法1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。试验步骤2再重新作一边。3、加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,0.5%SDS),混阅读全文
1.红细胞裂解液的稀释：根据处理血液样品的体积选取适当体积的10×红细胞裂解液（例如待处理的血液样品体积为200μl，则取140μl10×红细胞裂解液），用RNase-freedd阅读全文
1、取出细胞、收集上清保存备用2、用冷PBS冲洗细胞两次3、加入 1ml Trizol （24孔板每孔加0.5ml即可），调小刻度用移液器吹打细胞至液体澄清（生化：摇动混匀后室温孵育10min）4、将裂解阅读全文