Trizol柱纯化总RNA提取方法

作者:新景实验室
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1.50~100mg组织(新鲜或-70及液氮中保存的组织均可)置1.5ml EP管中,加入1ml Trizol充分匀浆,室温静置5min

2.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-810000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

3.加入0.2ml氯仿,剧烈振荡15~30s,静置2~3min

4.4离心,12000g×15min。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

5.小心吸取上清至一新的DEPC处理过的1.5ml EP管中(如要分离DNA和蛋白质可保留有机相),加入0.5ml异丙醇,将管中液体轻轻混匀,室温静置10min

6.4离心,12000g×10min。离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。

7.弃上清,于沉淀中加入75%乙醇(冰冷)1ml,振摇,充分洗涤沉淀。

8.4离心,12000g×5min

9.弃上清,短暂离心,小心吸取弃去上清。

10.加入适量(20μlDEPC Rnase FreeH20溶解RNA65促溶10~15min)。

11.2μl进行电泳,其余-80保存。